微生物限度检查-微生物限度-世纪久海

抑菌效力-菌液制备

取大肠埃希菌、金***putao球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成 适宜浓度的菌悬液。取表 2 黑曲霉的新鲜培养物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2～8℃，可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温***和***的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，微生物限度，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，纯化水微生物限度，本法不适用于活菌制剂的检查。

微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

如供试品有抗jun活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物***性。

供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物***性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。

2.薄膜过滤法

除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml或10c㎡供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，微生物限度检查，冲洗，药典微生物限度，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。

培养和计数 培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超100cfu。

菌数报告规则 以相当于1g、1ml或10c㎡供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以lt;1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10c㎡供试品），或lt;1乘以***低稀释倍数的值报告菌数。